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ELISA試劑盒SCI文章選購實(shí)驗(yàn)用品四要素
更新時(shí)間:2017-03-10   點(diǎn)擊次數(shù):1086次

1. ELISA試劑盒SCI文章實(shí)驗(yàn)類型

ELISA試劑盒有多種類型,不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。
通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn),雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間,這種方法既靈敏又有效,受到了許多研究者的青睞。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是*選擇,例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著,又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下,競爭性ELISA就更為適用,這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無標(biāo)記的抗原進(jìn)行競爭,以結(jié)合捕獲抗體。
抗體類型
ELISA試劑盒SCI文章單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,對(duì)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體(不論多抗還是單抗)的配對(duì)很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點(diǎn),為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測抗體所識(shí)別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突,就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題,我們可以選擇購買“matched pair”的捕獲/檢測抗體對(duì),這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才推薦的好組合,
交叉反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購買源自動(dòng)物的抗體越來越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測時(shí),檢測用的二抗必須特異性針對(duì)檢測一抗,而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗,來避免上述問題。
與此同時(shí),了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的(例如washing buffer和blocking buffer),以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分,使檢測結(jié)果收到影響。
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檢測方式

如今檢測ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶(例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP),而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測,堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。
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